手機版
微生物的生理生化反應的多樣性在自然界產(chǎn)生了兩種結(jié)果：一是使自然界的有機分子都可能得到分解；而是使不同微生物之間有了互相作用和互相依賴的物質(zhì)基礎。
一、實驗目的
根據(jù)細菌生理生化的差異，了解細菌碳、氮源代謝類型的多樣性，掌握部分根據(jù)生理生化反應進行細菌鑒定方法。 二、實驗原理 單糖發(fā)酵是將葡萄糖、乳糖或麥芽糖等分別加入蛋白胨水培養(yǎng)基內(nèi)，使其最終含量為7.5-10g/L，并加入一定量的溴甲酚紫指示劑及德漢氏小管，制成單糖發(fā)酵管，接種細菌經(jīng)37℃培養(yǎng)18-24h，若能分解糖產(chǎn)酸則指示劑由紫色變?yōu)辄S色，若能分解甲酸有二氧化碳和氫氣等氣體形成，小導管內(nèi)則聚集有氣泡；若不能分解，則指示劑不變色。 三、實驗步驟 1.將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌按照液體接種方法分別接種于葡萄糖及乳糖發(fā)酵管內(nèi)。 2.置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h。 3.觀察結(jié)果：由于一些細菌能分解某種糖類產(chǎn)酸，所以培養(yǎng)基中pH下降至7.0以下，在溴甲酚紫指示劑的顯示下，培養(yǎng)基顏色由紫色變黃色。產(chǎn)酸者以“+”表示；如果同時產(chǎn)生氣體，則培養(yǎng)基中倒置的小管內(nèi)有氣泡出現(xiàn)，此乃產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，以“⊕”表示；不分解，則指示劑不變色，用“-”表示。 Ⅱ 吲哚試驗 一、實驗原理
某些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水培養(yǎng)基中的色氨酸，產(chǎn)生吲哚（靛基質(zhì)），再與吲哚試驗（對二甲基氨基苯甲醛）反應，形成紅色化合物玫瑰吲哚，即為陽性反應。 二、實驗步驟 1.分別將大腸桿菌、枯草芽孢桿菌接種于兩支蛋白胨水培養(yǎng)基中。
2.置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h后，在兩支試管中分別滴加10-20滴乙醚，震蕩數(shù)次后靜置3min。
3.每管沿管壁緩緩加入3-5滴吲哚試劑于培養(yǎng)液面上，待1-2min后觀察。
4.結(jié)果顯示：在交界面出現(xiàn)玫瑰紅色環(huán)即為吲哚試驗陽性（+），無紅色環(huán)即為陰性（-）。 Ⅲ 甲基紅試驗 一、實驗原理 某些細菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，繼而分解為甲酸、乙酸、乳酸等，使培養(yǎng)基pH降至4.2以下，加入甲基紅指示劑呈紅色，此為陽性反應（+）；若產(chǎn)酸量少或產(chǎn)生的酸進一步轉(zhuǎn)化為醇、醛、氣體和水等，則培養(yǎng)基的pH仍為6.2以上，加入甲基紅指示劑呈黃色，此為陰性反應（-）。 二、實驗步驟 1.分別將大腸桿菌和枯草芽孢桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。
2.置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h取出，分別滴加2-3滴甲基紅試劑，混勻，觀察結(jié)果。 三、預期結(jié)果 大腸桿菌：+，枯草芽孢桿菌：-。 Ⅳ 伏-波試驗 一、實驗原理 有些細菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸進行縮合，脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境中被氧化為二乙酰，再與培養(yǎng)基內(nèi)精氨酸的胍基結(jié)合，生成紅色化合物，則為伏-波試驗陽性（+）。
二、實驗步驟 1.分別將大腸桿菌和枯草芽孢桿菌接種于兩支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中。
2.置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h，取出試管后倒掉一半培養(yǎng)液，然后分別加入氫氧化鉀水溶液5-10滴和等體積的α-奈酚乙醇溶液，搖勻，37℃水浴鍋水浴15-30min。 3.觀察結(jié)果：培養(yǎng)液變?yōu)榧t色為陽性（+），黃色為陰性（-）。 三、預期結(jié)果 大腸桿菌：-，枯草芽孢桿菌：+。 Ⅴ 檸檬酸鹽利用實驗 一、實驗原理
在檸檬酸培養(yǎng)基中檸檬酸鹽為唯一碳源。細菌分解培養(yǎng)基中的檸檬酸鹽、磷酸銨后產(chǎn)生堿性化合物，使培養(yǎng)基pH升高。因此，可根據(jù)能否利用檸檬酸鹽來鑒別細菌，如細菌可利用檸檬酸鹽作為碳源，細菌生長繁殖形成菌苔，分解檸檬酸鹽生成堿性碳酸鹽，使培養(yǎng)基pH上升到7.0以上，麝香草酚藍指示劑由綠色變?yōu)樯钏{色，為檸檬酸鹽利用試驗陽性（+）；如細菌不能分解檸檬酸鹽，則培養(yǎng)基顏色不發(fā)生變化，為檸檬酸鹽利用試驗陰性（-）。 二、實驗步驟 1.分別將大腸桿菌和枯草芽孢桿菌接種于兩支檸檬酸鹽斜面培養(yǎng)基中。
2.置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h后觀察結(jié)果。 三、預期結(jié)果 大腸桿菌：-（無菌苔生長，培養(yǎng)基不變色）。
枯草芽孢桿菌：+（有菌苔生長，培養(yǎng)基變色）。 Ⅵ 淀粉利用實驗 一、實驗原理 微生物對大分子物質(zhì)如淀粉不能直接利用，必須依靠產(chǎn)生的胞外酶將大分子物質(zhì)分解，才能被微生物吸收利用。有些細菌有合成淀粉酶的能力，可以分泌胞外淀粉酶，淀粉酶可水解淀粉為麥芽糖和葡萄糖，淀粉水解后遇碘不再變藍色。 二、實驗步驟 1.分別結(jié)合總大腸桿菌、枯草芽孢桿菌至同一個淀粉固體培養(yǎng)基上，并在平板的反面進行標記；注意接種長度盡量相等。
2..置于37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)18-24h后觀察細菌的生長情況，滴入少量魯氏碘液，輕輕旋轉(zhuǎn)平板使碘液均勻鋪滿整個平板。
3.觀察結(jié)果，如菌苔周圍出現(xiàn)無色透明圈，說明淀粉被水解，為陽性（+）；透明圈的大小反應細菌水解淀粉能力的強弱。 三、預期結(jié)果 大腸桿菌：-，枯草芽孢桿菌：+。 四、注意事項 1.該實驗內(nèi)容中所涉及菌種是作為生理生化反應的對比菌種，重點注意避免發(fā)生交叉污染和標記錯亂的現(xiàn)象。
2.使用酒精燈時需要特別注意操作安全，70%乙醇、乙醚等化學試劑可以燃燒，需要遠離明火。單糖發(fā)酵試驗部分，在接種后需要注意請緩搖動試管時避免氣泡進入倒置小管中；吲哚試驗部分，乙醚萃取過程一定要充分和靜置，再沿管壁滴加吲哚試劑以避免破壞已分層界面。
例如，一種微生物能利用另一種微生物所分解的產(chǎn)物，或者一種微生物的產(chǎn)物可抑制或殺死另一種微生物。
不同細菌由于所含的酶系統(tǒng)不完全相同，因而對營養(yǎng)物質(zhì)的分解能力及代謝產(chǎn)物亦不一致，所以，微生物的生理生化反應也被作為細菌鑒定和分類的主要內(nèi)容之一。
本節(jié)內(nèi)容中有4個是用來快速鑒別大腸桿菌和產(chǎn)氣腸桿菌，多用于水的細菌檢查，常合稱為IMViC試驗。
IMViC是吲哚試驗（indol test）、甲基紅試驗（methyl red test，MR試驗）、伏-波試驗（Vogen-Prokauer test，V-P試驗）和檸檬酸鹽利用試驗（citrate test）4個實驗的縮寫，其中，i是在英文中為了發(fā)音方便而加上去的。
Ⅰ 單糖發(fā)酵試驗
