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培養(yǎng)基經(jīng)高壓滅菌后，用經(jīng)過(guò)滅菌的工具（如接種針和吸管等）在無(wú)菌條件下接種含菌材料（如樣品、菌苔或菌懸液等）于培養(yǎng)基上，這個(gè)過(guò)程叫做無(wú)菌接種操作。 在實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)中的各種接種必須是無(wú)菌操作。
2. 接種針冷卻
接種針滅菌后，移到酒精燈旁邊冷卻，備用。
配制好固體或液體培養(yǎng)基后，利用高壓蒸汽滅菌鍋進(jìn)行滅菌，經(jīng)過(guò)滅菌后培養(yǎng)基里無(wú)任何微生物，在超過(guò)經(jīng)工作臺(tái)內(nèi)，用接種針等將目標(biāo)菌種接種到培養(yǎng)基中的過(guò)程。
劃線分離：
由接種環(huán)沾取少許待分離的材料，在無(wú)菌平板表面進(jìn)行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續(xù)劃線，微生物細(xì)胞數(shù)量將隨著劃線次數(shù)的增加而減少，并逐步分散開(kāi)來(lái)，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經(jīng)培養(yǎng)后，可在平板表面得到單菌落。
①取菌種：取出目標(biāo)菌種，融化后，備用；
②接種針滅菌：灼燒接種針進(jìn)行滅菌；
③接種針冷卻：將接種針移至酒精燈旁邊冷卻；
④蘸取菌種：甘油管用75%酒精消毒，待酒精揮發(fā)完全，在酒精燈火焰略微滅菌（防止烤糊），然后用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌種；
⑤劃線：取已經(jīng)備好的固體平板，邊轉(zhuǎn)動(dòng)平板邊用酒精燈火焰滅菌，打開(kāi)平板（靠口朝酒精燈），用上述接種環(huán)在平板上劃線，先在一側(cè)連續(xù)劃線3-4次，邊轉(zhuǎn)動(dòng)平板邊用酒精燈灼燒接種環(huán)，冷卻后，用接種環(huán)穿過(guò)第一次劃線部分繼續(xù)劃線3-4次，同樣方法進(jìn)行第三次劃線，或第四次劃線（根據(jù)菌液濃度和菌種類型確定劃線次數(shù)），灼燒接種環(huán)；
⑥標(biāo)記：在平板底部邊緣處標(biāo)記菌種名稱，日期和其他信息；
涂布法接種：
先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無(wú)菌平板中，然后用無(wú)菌吸管吸取0.1ml 菌液接種在已凝固的瓊脂平板上。再用無(wú)菌L 型玻璃棒將菌液在平板上涂抹均勻，將涂抹好的平板平放于桌上20~30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。
①取菌種：取出目標(biāo)菌種平板；
②接種針滅菌：灼燒接種針進(jìn)行滅菌；
③接種針冷卻：將接種針移至酒精燈旁邊冷卻；
液體接種
將接種環(huán)送入液體培養(yǎng)基時(shí)使環(huán)在液體與管壁接觸的地方輕輕磨擦，使菌體分散，塞上試管塞再輕輕搖勻。
多用于增菌液進(jìn)行增菌培養(yǎng)，也可用純培養(yǎng)菌接種液體培養(yǎng)基進(jìn)行生化試驗(yàn)，其操作方法與注意事項(xiàng)與斜面接種法基本相同。
傾倒法接種：
吸取1ml 菌液加入平板中，倒入已融化并冷卻至45~50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平板，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷疑后倒置，適溫培養(yǎng)。至長(zhǎng)出菌落后即可計(jì)數(shù)。
螺旋接種法：
可以在無(wú)任何全部或中間稀釋的情況下快速細(xì)菌接種。對(duì)數(shù)減少的樣品容量以阿基米德螺旋線的形式被自動(dòng)分注在旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)基表面。培養(yǎng)基上每一點(diǎn)的容量可以被知曉和校準(zhǔn)。菌液的濃度可以通過(guò)培養(yǎng)皿上一定區(qū)域的菌落數(shù)量除以同區(qū)域樣品分注量來(lái)計(jì)算。
四、微生物檢驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)
（1）在操作中不應(yīng)有大幅度或快速的動(dòng)作； （2）使用玻璃器皿應(yīng)輕取輕放； （3）在正火焰上方操作； （4）接種用具在使用前、后都必須灼燒滅菌； （5）在接種培養(yǎng)物時(shí)，協(xié)作應(yīng)輕、準(zhǔn)； （6）不能用嘴直接吸吹吸管； （7）帶有菌液的吸管、玻片等器材應(yīng)及時(shí)置于盛有5%來(lái)蘇爾溶液的消毒桶內(nèi)消毒。
