一. 分離原理

    尺寸排阻色譜法：是按分子尺寸的差異進行分離的一種液相色譜方法，也稱凝膠色譜法。

    排阻色譜的固定相多為凝膠。凝膠是一種由有機分子制成的分子篩 , 其表面惰性 , 含有許多不同大小孔穴或立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。凝膠的孔穴大小與被分離組分大小相當 , 對不同大小的組分分子則可分別滲到凝膠孔內(nèi)的不同深度。尺寸大的組分分子可以滲入到凝膠的大孔內(nèi) , 但進不了小孔 , 甚至于完全被排斥，先流出色譜柱。尺寸小的組分分子, 大孔小孔都可以滲進去, 最后流出。因此 , 大的組分分子在色譜柱中停留時間較短, 很快被洗出。小的組分分子在色譜柱中停留時間較長。經(jīng)過一定時間后, 各組分按分子大小得到分離。

    當組分X進入柱子后,它就要從高濃度的流動相向固定相孔隙內(nèi)的流動相擴散。當組分X進入色譜固定相達到擴散平衡時：

X_m ⇌ X_n

組分的分配系數(shù)為：       

尺寸排阻色譜中任何組分的分配系數(shù)應符合：0 ≤ K ≤ 1

二. 固定相

    尺寸排阻色譜常用固定相有無機和有機兩大類。

無機凝膠：又稱硬質(zhì)凝膠。是具有一定孔徑范圍的多孔性凝膠，如多孔硅膠、多孔玻璃珠等，此類凝膠化學惰性、穩(wěn)定性及機械強度均好，耐高溫，使用壽命長，但裝柱時易碎，不易裝緊，柱效較低。

有機凝膠：又稱半硬質(zhì)凝膠。如苯乙烯二乙烯苯交聯(lián)共聚物凝膠，能耐較高壓力，適用于有機溶劑作流動相，有一定可壓縮性，可填得緊密，柱效較高。但在有機溶劑中有輕度膨脹。新型凝膠色譜填料，克服了傳統(tǒng)軟填料的一些弱點，粒度細，機械強度高，分離速度快，效果好，特別是無機填料表面鍵合親水性單分子層或多層覆蓋的單糖或多糖型等填料廣泛用于生物大分子的分離。

三. 流動相

    尺寸排阻色譜流動相：從樣品的溶解性考慮，流動相應與凝膠本身有相似性，黏度低，與樣品的折光率相差大；能潤濕凝膠，防止吸附作用。

    常用的流動相有四氫呋喃、甲苯、N，N’-二甲基甲酸胺、三氯甲烷（凝膠滲透色譜）；水（凝膠過濾色譜）等。

（可用于分離相對分子質(zhì)量大的分子，如蛋白質(zhì)、核酸等）