金銀花FlosLonicerae又名忍冬、雙花，為臨床常用中藥，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功效，主治癰腫疔瘡、喉痹、丹毒、熱毒血痢、風(fēng)熱感冒、溫病發(fā)熱等。在中成藥中，金銀花或以細(xì)粉直接入藥，或以提取物的形式入藥，但大部分制劑以后者的形式入藥。

      目的建立金銀花提取物中綠原酸含量的HPLC測(cè)定方法。方法國(guó)產(chǎn)C18柱（4.6mm×250mm，7μm）；流動(dòng)相為乙腈：0.4%磷酸（12∶88）；檢測(cè)波長(zhǎng)為327nm；流速1ml·min-1；進(jìn)樣量10μl；柱溫25℃。結(jié)果綠原酸在0.0716～0.6444μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，r=0.9996；平均回收率99.99%，RSD=1.61%（n=6）。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可用于金銀花提取物的含量測(cè)定及質(zhì)量控制。

      金銀花入藥有兩種形式，一是以全草直接投料，煎煮入藥，即以煎煮液（即藥材的提取液）作為半成品（中間體）；另一種是先提取有效部位，而后以提取物投料，即以提取物作為中間體（原料）（劉艷娥《第二軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文》）。為了有效控制金銀花提取物（中間體）的內(nèi)在質(zhì)量，本實(shí)驗(yàn)參考了有關(guān)文獻(xiàn)［2，3］及2005版《中國(guó)藥典》［4］方法，采用高效液相色譜法測(cè)定金銀花提取物中綠原酸含量。

      1儀器與試藥Agilent1100series高效液相色譜儀（G1322A排氣閥，G1311A泵，G1316A柱溫箱，G1314A紫外檢測(cè)器），chemistation色譜工作站，KromasilC18色譜柱，超聲提取器（KQ3200DE型數(shù)控超聲儀昆山市超聲儀器有限公司）；綠原酸對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品鑒定所，批號(hào)110753-200212），金銀花提取物（本實(shí)驗(yàn)室自制），乙腈，磷酸均為分析純；水為雙蒸水。

      2方法與結(jié)果［5］2.1分析方法的建立——分離及檢測(cè)條件的選擇2.1.1色譜條件色譜柱為國(guó)產(chǎn)KromasilC18柱（250mm×4.6mm，7μm）；柱溫25℃；流動(dòng)相為乙腈-0.4%磷酸（12∶88）；流速為1ml·min-1；檢測(cè)波長(zhǎng)327nm。

      2.1.2pH值對(duì)峰形的影響綠原酸屬于有機(jī)酸類(lèi)物質(zhì)，在HPLC測(cè)定時(shí)易發(fā)生前沿或拖尾峰，流動(dòng)相加入酸可以改善這種現(xiàn)象。本實(shí)驗(yàn)比較了水、乙酸、磷酸對(duì)峰形的影響，當(dāng)選用0.4%磷酸時(shí)，可得到較好的色譜峰形。

      2.1.3色譜系統(tǒng)適應(yīng)性實(shí)驗(yàn)在選定條件下，綠原酸和樣品中其他組分可基線分離，綠原酸與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，理論塔板數(shù)（N）為5000以上。

      a-對(duì)照品b-供試品2.2對(duì)照品溶液的制備精密稱(chēng)取綠原酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含35.8μg的溶液，即得。2.3供試品溶液的制備精密稱(chēng)取本提取物10mg，置100ml容量瓶中，雙蒸水溶解，超聲2min后，再用雙蒸水定容至刻度，搖勻，過(guò)0.45μg微孔濾膜，取續(xù)濾液即得。

      2.4線性范圍的考察及其標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對(duì)照品溶液2，4，6，10，14，18μl，分別注入液相色譜儀。按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積積分值（A）對(duì)進(jìn)樣量進(jìn)行回歸，得回歸曲線方程：Y=2468.4X-16.205，r=0.9996。結(jié)果表明，綠原酸在0.0716～0.6444μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

      2.5精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取對(duì)照品溶液10μl，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄各組綠原酸峰面積值，結(jié)果平均峰面積為：840.5，RSD為0.69%（n=6）。

      2.6穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)取同一供試品溶液，分別于0，2，4，6，8h進(jìn)樣10μl，測(cè)得綠原酸的平均峰面積值為：680.24，RSD為：0.38%（n=5），表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

      2.7重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批號(hào)（070204）樣品6份，按含量測(cè)定方法測(cè)定，結(jié)果綠原酸平均含量為28.01%，RSD為1.07%（n=6）。

      2.8加樣回收率實(shí)驗(yàn)精密稱(chēng)取已知含量的金銀花提取物6份，分別精密添加綠原酸對(duì)照品適量，按供試品溶液的方法制備，測(cè)定，計(jì)算回收率。

      2.9樣品測(cè)定取3批樣品，按照上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μl，依照已確定的色譜條件測(cè)定，按峰面積值用外標(biāo)法計(jì)算樣品中綠原酸的含量。

      3討論金銀花提取物以有機(jī)酸為有效成分，本實(shí)驗(yàn)以綠原酸含量作為金銀花提取物的質(zhì)量控制指標(biāo)，同時(shí)測(cè)定了3批金銀花提取物中綠原酸的含量，通過(guò)計(jì)算，其含量均在20%以上。本文所建立的方法簡(jiǎn)便、快捷，重復(fù)性及穩(wěn)定性均較好，可在實(shí)際生產(chǎn)中用于該提取物的質(zhì)量控制。本文所做的工作為開(kāi)發(fā)金銀花的相關(guān)產(chǎn)品提供了質(zhì)量監(jiān)控方法。