我們都知道,微生物無處不在,而且微生物個體十分小,肉眼無法直接進行觀察,必須要借助顯微鏡進行觀察,一些不易觀察的菌還需要借助染色之后才能清楚看到。
今天我們就來探討一下
CFU到底是什么?
菌落總數(shù)往往采用的是平板計數(shù)法,經(jīng)過培養(yǎng)后數(shù)出平板上所生長出的菌落個數(shù),從而計算出每毫升或每克待檢樣品中可以培養(yǎng)出多少個菌落,于是以CFU/ml或CFU/g報告。
PART.01定義
我們先來看看CFU的國際定義。
CFU:Acolony-forming unit(CFU,cfu,CFu)is a unit used in microbiology to estimate the number of viable bacteria or fungal cells in a sample.(菌落形成單位是指微生物學(xué)中用于估算樣品中活的細菌或者真菌數(shù)量的單位。)
具體來說,CFU就是在活菌培養(yǎng)計數(shù)時,由單個菌體或聚集成團的多個菌體在固體培養(yǎng)基上生長繁殖所形成的集落,指的是單位體積中的細菌、霉菌、酵母等微生物的群落總數(shù)。
CFU是形成菌落的菌落個數(shù),不等于細菌個數(shù)。(比如兩個相同的細菌靠得很近或貼在一起,那么經(jīng)過培養(yǎng)這兩個細菌將會形成一個菌落,此時就是2個細菌,1CFU)。
PART.02CFU計數(shù)的要求
理論上,一個活細菌可以在條件合適的固體表面上形成一個菌落,但是吸附于微小顆粒上的兩個以上菌體或粘連在一起的菌團可能共同形成一個菌落,而且不同環(huán)境因素作用下,細菌的生活能力各不相同,會影響其在該條件下形成菌落的能力,致使形成的菌落數(shù)遠低于實際的活菌數(shù)。
這種方式得出的數(shù)據(jù)并不能直接等于樣品中的微生物數(shù)量,而是一種認可的估算,這就要求操作者在進行涂布平板或者接種之前把微生物活菌進行充分的均勻分散。但是一些鏈球菌、球菌等天生就不能單細胞分散均勻。
另外,考慮到各類樣品的微生物含量不一,為使CFU區(qū)間按照國標(biāo)計算方法有效落在30-300之間,必須要保證合理的稀釋倍數(shù),過多或者過少都不合適。
PART.03 CFU是一種估算方法
使用菌落形成單位進行計數(shù)與一般的計數(shù)方式不同,一般在顯微鏡下計算細菌數(shù)量,會將活菌與死菌都計入其中,但是CFU計數(shù)只有是活菌才能在平板上生長形成菌落,因此只計算活菌數(shù)量。理論上只要分散足夠均勻,一個活細胞形成一個CFU,但是實驗中為了分散細菌,經(jīng)常會導(dǎo)致細菌死亡,從而無法生長成單菌落。
同時,微生物最終能否在平板上生長成一個菌落,還和培養(yǎng)基本身、培養(yǎng)時的條件、微生物自身的狀態(tài)等各種各樣的因素有關(guān)。這就注定了CFU不能是一種精確計數(shù)的計量方式。
總之,CFU是一種估算方法,選擇CFU進行計量表示時,就代表使用者已認同它的不精確性,需要接受這種測量方式的誤差。最后舉例來說,若定量菌種的菌種數(shù)量標(biāo)示的是“CFU”,代表是用培養(yǎng)基法來計數(shù)的。若定量菌種是用流式細胞儀等其他方式計數(shù),標(biāo)示“個”更為合理。
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