1.1菌株的采集
實(shí)驗(yàn)室用菌種一是到國家法定機(jī)構(gòu)采購,二是購買商業(yè)派生菌種,三是科研中菌種交流。不管是哪種來源,均統(tǒng)一采集。采集中嚴(yán)格按照規(guī)范執(zhí)行。要求包裝可靠,采集迅速,不泄漏不污染。保證菌種合格和環(huán)境安全。采集中要有菌種傳代標(biāo)識(shí)。選擇有資質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)菌株的合格供應(yīng)商,每批標(biāo)準(zhǔn)菌株必須附帶有供應(yīng)商的合格證或檢測報(bào)告或說明書,來證明所采購的標(biāo)準(zhǔn)菌株是合格的。
1.2標(biāo)準(zhǔn)菌株和驗(yàn)收
實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)準(zhǔn)菌株,首先應(yīng)進(jìn)行符合性感官檢查,記錄菌株號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)菌株來源途徑信息,確保溯源性清楚。同時(shí)還應(yīng)記錄標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無破損等情況。
1.3凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活
1.3.1開啟產(chǎn)品包裝:先用70%酒精棉擦拭外包裝,再打開使用。
1.3.2復(fù)活:選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件(根據(jù)菌種使用說明書,見附錄)進(jìn)行復(fù)活。菌種的首次活化最好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上,除非特殊情況或特別推薦,一般不用液體培養(yǎng)基。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過5代,從標(biāo)準(zhǔn)菌株保藏中心購買的凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株為第0代。
1.4工作菌株確認(rèn)方法及依據(jù)
用無菌接種環(huán)取上述培養(yǎng)物,在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板(營養(yǎng)瓊脂、大豆胰蛋白胨瓊脂)上或相應(yīng)的細(xì)菌鑒別平板(如伊紅美藍(lán)、麥康凱、BP等上劃線分離單個(gè)菌落,置適宜條件下培養(yǎng)(若該類微生物為厭氧菌,則培養(yǎng)條件應(yīng)為厭氧條件)。以同樣方法取真菌和酵母菌至SDA(薩布羅培養(yǎng)基)平板上或玫瑰紅鈉培養(yǎng)基平板上,23~28℃下培養(yǎng)7d;培養(yǎng)后觀察是否具有典型的菌落狀態(tài),然后挑取單一純菌落,進(jìn)行革蘭染色、鏡檢,觀察其染色特征及菌體形態(tài)以確定菌種。
1.5 污染處理
假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他菌落生長,則說明操作有污染或菌種不純。要將該污染培養(yǎng)物做滅菌處理,尋找原因,重新分離挑選純菌落。