利用超靈敏UPLC®-MS/MS對(duì)肌肉組織中的低濃度保泰松進(jìn)行快速檢測(cè)和定量。

 

近來(lái)調(diào)查結(jié)果顯示，在歐洲的牛肉制品中發(fā)現(xiàn)未經(jīng)申報(bào)的馬肉，這一事件的發(fā)生迫切要求相關(guān)企業(yè)和監(jiān)管機(jī)構(gòu)對(duì)肉類和肉制品中存在的馬肉組織和殘留的非甾體抗炎藥（NSAID）保泰松（PBZ）進(jìn)行分析檢測(cè)。保泰松是一種獸藥，在一些歐盟成員國(guó)，這種藥用于為非食品用途的動(dòng)物（狗和馬）緩解疼痛和減輕炎癥。但是，這種藥物被規(guī)定不得用于治療參與人類食物鏈的動(dòng)物。因此，任何動(dòng)物源性食品中存在此物質(zhì)通常是由于非法使用經(jīng)過(guò)治療的馬尸體所導(dǎo)致的。

 

 

本研究引用了一種已報(bào)道的從肌肉組織中提取保泰松的方法1，并對(duì)該方法做了較小調(diào)整。簡(jiǎn)單來(lái)講，即取肉勻漿2 g，加入乙腈10 mL，振搖2 min。離心后，收集上清液并用水進(jìn)行稀釋。使用沃特世（Waters®） Oasis®HLB 60 mg，將第一步所得的稀釋提取物進(jìn)行固相萃取(SPE)。用甲醇洗脫保泰松，然后用含10 mM甲酸銨(pH 3.2)的水進(jìn)行稀釋。在進(jìn)行固相提取及上樣之前，對(duì)提取物分別進(jìn)行稀釋，這樣，無(wú)需進(jìn)行蒸發(fā)和復(fù)溶操作。取100μL稀釋上樣液，注入LC-MS/MS系統(tǒng)進(jìn)行分析。

 

選擇并優(yōu)化了兩個(gè)多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）離子對(duì)（定量和確證）對(duì)保泰松進(jìn)行分析。所得結(jié)果已添加到QuanpediaTM數(shù)據(jù)庫(kù)以便將來(lái)使用。在本應(yīng)用中，色譜分析采用2.1×100 mm HSS T3分析型色譜柱(1.7μm)，以甲醇/水（10mM甲酸銨，pH 3.2)進(jìn)行梯度洗脫，梯度時(shí)間為5 min。圖1顯示了200 ng/kg保泰松加標(biāo)提取物的MRM色譜圖。如圖1所示，保泰松和內(nèi)標(biāo)（100 ng/kg）的信噪比高，峰形良好。校正回收率后的工作標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖2所示，制備基質(zhì)加標(biāo)樣品兩份，并進(jìn)行提取，建立六點(diǎn)校準(zhǔn)曲線。根據(jù)線性回歸，計(jì)算校準(zhǔn)曲線（1/x2加權(quán)），以保泰松-二苯基13C12作為內(nèi)標(biāo)。由結(jié)果數(shù)據(jù)可知，可輕松達(dá)到最低校準(zhǔn)點(diǎn)(10 ng/kg)，比歐盟建議的濃度（RC)5μg/kg低500倍。在整個(gè)檢測(cè)濃度范圍內(nèi)（10-500ng/kg），線性良好（R2 0.997）。在處理肉制品的過(guò)程中，馬肉可能以其它途徑摻入其中，保泰松濃度水平可能遠(yuǎn)低于EU RC，因此檢測(cè)靈敏度是一個(gè)重要的考慮因素。

 

ACQUITY UPLC®I-Class系統(tǒng)與Xevo®TQ-S聯(lián)用，并結(jié)合Waters ACQUITY UPLC HSS T3色譜柱可對(duì)肉中濃度低至10 ng/ kg的保泰松進(jìn)行分析。即使對(duì)于濃度可能很低的經(jīng)混合和經(jīng)處理的肉制品，這種超靈敏的UPLC-MS/MS技術(shù)仍能確保成功檢出受污染產(chǎn)品。

 

1. N. Van Hoof, K. De Wasch, S. Poelmans, H. Noppe and H. De Brabander Rapid Commun. Mass Spectrom. 2004; 18: 2823–2829