國標《GB 5009.168-2016 食品安全國家標準 食品中脂肪酸的測定》按照定量方法分為三個方法，分別是內標法、外標法和歸一化法。內標法需要使用37種脂肪酸甲酯混標作為定性外標，十一碳酸甘油三酯作為定量內標；外標法需要使用相應的脂肪酸甘油三酯作為定量外標；歸一化法需要使用37種脂肪酸甲酯混標作為定性外標。

從國標GB 5009.168-2016的截圖，可以看出，內標法需要配置5mg/mL十一碳酸甘油三酯的內標溶液；而混合脂肪酸甲酯標液不需要配置標準曲線，僅用于定性和脂肪酸甲酯響應因子的計算。

如果選購37種脂肪酸甲酯混合標液（不同濃度于異辛烷，總計10 mg/mL），建議取1.0mL 混合標液稀釋至5mL或10mL，得到總計2mg/mL或1mg/mL的37種脂肪酸甲酯混合標準使用液。

脂肪酸甲酯混標的作用主要是用來計算脂肪酸甲酯相對十一碳酸甲酯的響應因子，因此進樣單點的標準溶液即可；樣品中脂肪酸甲酯的含量計算主要取決于樣品中添加的十一碳酸甲酯內標的含量和樣品中各脂肪酸甲酯的峰面積及其響應因子。樣品中脂肪酸的含量需要由脂肪酸甲酯的含量再乘以轉換系數得到。

不同品牌、不同規(guī)格的色譜柱，色譜柱污染、柱效下降的色譜柱都可能導致37種脂肪酸的分離有所變化，建議可通過調整流速等參數優(yōu)化色譜條件，以達到最優(yōu)分離度。

建議先在0.8mL/min 的流速條件下查看目標峰的分離情況，根據出峰情況，如果是31號和32號峰分離變差就增加流速，如果是24號峰、30號峰和35號峰分離變差就減小流速，通過流速的微調以找到最優(yōu)的分離條件。具體調整方法可查看安譜實驗相關的單頁“37種脂肪酸甲酯分離的小秘密，你知道嗎？”。

外標法使用脂肪酸甘油三酯作為標準品，但需要將脂肪酸甘油三酯標準溶液經過酯交換轉變?yōu)橹�肪酸甲酯上機檢測，不可直接將脂肪酸甘油三酯直接上機檢測，也不可使用脂肪酸甲酯作為外標進行定量計算。

外標法是直接計算樣品中脂肪酸的含量，不需要計算脂肪酸甲酯的含量。通過脂肪酸甘油三酯的單點外標法進行計算，計算結果主要與脂肪酸甘油三酯標準溶液的濃度、脂肪酸甲酯的峰面積和脂肪酸甘油三酯轉化為脂肪酸的系數有關。脂肪酸甘油三酯標準溶液濃度的選擇可根據實際樣品中脂肪酸的含量進行優(yōu)化調整，使其盡量接近樣品中含量。

二、《GB 5009.257-2016 食品安全國家標準 食品中反式脂肪酸的測定》