蛋白濃縮方法基本有:
丙酮沉淀法;免疫沉淀法;三氯醋酸沉淀法;硫酸銨沉淀法;(低溫)有機(jī)溶劑沉淀法;聚乙二醇沉淀法;超濾法;透析法;離子交換層析和冷凍干燥法……
1,丙酮沉淀法;三氯醋酸沉淀法 試驗(yàn)要求的儀器簡單,但是常常導(dǎo)致蛋白質(zhì)變性。
2,免疫沉淀法:得有特異性抗體!
3,硫酸銨沉淀法:利用高濃度鹽將蛋白質(zhì)析出(鹽析)
選擇硫酸按是因?yàn)椋蝴}析有效性,pH范圍廣,溶解度高,溶液散熱少,經(jīng)濟(jì)!
4,(低溫)有機(jī)溶劑沉淀法:強(qiáng)調(diào)低溫(0-4度以下)是因?yàn)?0度時蛋白會在有機(jī)溶劑中變性,可用乙醇,丙酮……注意:Mg2 離子,pH值
5,聚乙二醇沉淀法:使用PEG時旨在個別情況下才會是蛋白質(zhì)稍有變性!他溶解是散熱低,形成沉淀的平衡時間短,通常達(dá)到30%時蛋白質(zhì)就會達(dá)到最大量的沉淀!
6,超濾法:主要針對小體積蛋白質(zhì)溶液(幾ml)此法更不易引起變性!不過得有濃縮器,不是哪個實(shí)驗(yàn)室都有的!
7,透析法:主要用于更換蛋白質(zhì)的緩沖液!的有透析袋!不需要特殊的儀器!
8,離子交換層析:可用陰離子交換樹脂進(jìn)行濃縮!
9,冷凍干燥法:在冷凍狀態(tài)下讓揚(yáng)品種的液體升華
具體你的實(shí)驗(yàn)應(yīng)該是做一種分泌蛋白吧?
濃縮后要干什么,需要活性蛋白么?
實(shí)驗(yàn)室設(shè)備如何,導(dǎo)師經(jīng)費(fèi)如何?
這些都要考慮!