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微生物檢驗(yàn)程序培訓(xùn)?看這里!

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2020-01-10
核心提示:食品微生物檢驗(yàn)是一門(mén)應(yīng)用微生物學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)方法的一門(mén)科學(xué),是對(duì)食品和微生物的存在與否及種類(lèi)和數(shù)量的驗(yàn)證。眾所周知,在生物


食品微生物檢驗(yàn)是一門(mén)應(yīng)用微生物學(xué)理論與實(shí)驗(yàn)方法的一門(mén)科學(xué),是對(duì)食品和微生物的存在與否及種類(lèi)和數(shù)量的驗(yàn)證。眾所周知,在生物科學(xué)中,微生物學(xué)是一門(mén)實(shí)踐性最強(qiáng)的學(xué)科之一,它有一套自己獨(dú)特的研究方法。
要學(xué)習(xí)好微生物檢驗(yàn),必須具有食品微生物學(xué)等學(xué)科的基礎(chǔ),要熟悉各種致病菌的生物學(xué)特性;掌握各種致病菌、霉菌和病毒的檢驗(yàn)程序。

 

 


食品微生物檢驗(yàn)的一般步驟

 

檢驗(yàn)前準(zhǔn)備

(1)準(zhǔn)備好所需的各種儀器,如冰箱、恒溫水浴箱、顯微鏡等。

(2)各種玻璃儀器,如吸管、平皿、廣口瓶、試管等均需刷洗干凈(121℃20min)或干法(160℃一170℃,2h)滅菌,冷卻后送無(wú)菌室備用。

(3)準(zhǔn)備好實(shí)驗(yàn)所需的各種試劑、藥品,做好普通瓊脂培養(yǎng)基或其他選擇性培養(yǎng)基,根據(jù)需要分裝試管或滅菌后傾注平板或保存在46℃的水浴中或保存在4℃的冰箱中備用。

(4)無(wú)菌室滅菌;如用紫外燈法滅菌,時(shí)間不應(yīng)少于45min,關(guān)燈半小時(shí)后方可進(jìn)入工作;如用超凈工作臺(tái),需提前半小時(shí)開(kāi)機(jī)。必要時(shí)進(jìn)行無(wú)菌室的空氣檢驗(yàn),把瓊脂平板暴露在空氣中15min,培養(yǎng)后每個(gè)平板上不得超過(guò)15個(gè)菌落。

(5)檢驗(yàn)人員的工作衣、帽、鞋、口罩等滅菌后備用。工作人員進(jìn)入無(wú)菌室后實(shí)驗(yàn)沒(méi)完成前不得隨便出入無(wú)菌室。

 

 

樣品的采集與處理

 

在食品的檢驗(yàn)中,樣品的采集是極為重要的一個(gè)步驟。所采集的樣品必須具有代表性,這就要求檢驗(yàn)入員不但要掌握正確的采樣方法,而且要了解食品加工的批號(hào)、原料的來(lái)源、加工方法、保藏條件、運(yùn)輸、銷(xiāo)售中的各環(huán)節(jié),以及銷(xiāo)售入員的責(zé)任心和衛(wèi)生知識(shí)水平等。樣品可分為大樣、中樣、小樣三種。

大樣指一整批,中樣是從樣品各部分取的混合樣,一般為200g小樣又稱(chēng)為檢樣,一般以25g為準(zhǔn),用于檢驗(yàn)。樣品的種類(lèi)不同,采樣的數(shù)量及采樣的方法也不一樣。但是,一切樣品的采集必須具有代表性,即所取的樣品能夠代表食物的所有成分。如果采集的樣品沒(méi)有代表性,即使一系列檢驗(yàn)工作非常精密、淮確,其結(jié)果也毫無(wú)價(jià)值,甚至?xí)霈F(xiàn)錯(cuò)誤的結(jié)論。

取樣及樣品處理是任何檢驗(yàn)工作中最重要的組成部分,以檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性來(lái)說(shuō),實(shí)驗(yàn)室收到的樣品是否具代表性及其狀態(tài)如何是關(guān)鍵問(wèn)題。如果取樣沒(méi)有代表性或?qū)悠返奶幚聿划?dāng),得出的檢驗(yàn)結(jié)果可能毫無(wú)意義。如果根據(jù)一小份樣品的檢驗(yàn)結(jié)果去說(shuō)明一大批食品的質(zhì)量或一起食物中毒的性質(zhì),那么設(shè)計(jì)一種科學(xué)的取樣方案及采取正確的樣品制備方法是必不可少的條件。


 


食品微生物檢驗(yàn)的取樣方案

采用什么樣的取樣方案主要取決于檢驗(yàn)的目的.例如用一般的食品的衛(wèi)生學(xué)微生物檢驗(yàn)去判定一批食品合格與否;查找食物中毒病原微生物;鑒定畜禽產(chǎn)品中是否含有人獸共患病原體等等。目的不同,取樣方案也不同。
1.食品衛(wèi)生學(xué)微生物檢驗(yàn)的取樣方案
目前國(guó)內(nèi)外使用的取樣方案多種多樣,如一批產(chǎn)品采若干個(gè)樣后混合在一起檢驗(yàn),按百分比抽樣;按食品的危害程度不同抽樣;按數(shù)理統(tǒng)計(jì)的方法決定抽樣個(gè)數(shù)等等。不管采取何種方案,對(duì)抽樣代表性的要求是一致的。最好對(duì)整批產(chǎn)品的單位包裝進(jìn)行編號(hào),實(shí)行隨機(jī)抽樣。下而列舉當(dāng)今世界上較為常見(jiàn)的幾種取樣方案。
(1) ICMSF的取樣方案
國(guó)際食品微生物規(guī)范委員會(huì)(簡(jiǎn)稱(chēng)ICMSF)的取樣方案是依據(jù)事先給食品進(jìn)行的危害程度劃分來(lái)確定的,將所有食品分成三種危害度
I類(lèi)危害:老人和嬰幼兒食品及在食用前可能會(huì)增加危害的食品;
Ⅱ類(lèi)危害:立即食用的食品,在食用前危害基本不變;
Ⅲ類(lèi)危害:食用前經(jīng)加熱處理,危害減小的食品。
另外,將檢驗(yàn)指標(biāo)對(duì)食品衛(wèi)生的重要程度分成一般、中等和嚴(yán)重三檔,根據(jù)以上危害度的分類(lèi),又將取樣方案分成二級(jí)法和三級(jí)法。
①二級(jí)法:設(shè)定取樣數(shù)n,指標(biāo)值m,超過(guò)指標(biāo)值m的樣品數(shù)為c,只要有c個(gè)樣品的結(jié)果大于或等于m,就判定整批產(chǎn)品不合格。
②三級(jí)法:設(shè)定取樣數(shù)n,指標(biāo)值m,附加指標(biāo)值M,介于m與M之間的樣品數(shù)c。只要有一個(gè)樣品值超過(guò)M或C規(guī)定的數(shù)就判整批產(chǎn)品不合格。
(2)美國(guó)FDA的取樣方案
美國(guó)食品與藥品管理局(FDA)的取樣方案與ICMSF的取樣方案基本一致,所不同的是嚴(yán)重指標(biāo)菌所取的15、30、60個(gè)樣可以分別混合,混合的樣品量最大不超過(guò)375g。也就是說(shuō)所取的樣品每個(gè)為100g,從中取出25g,然后將15個(gè)25g混合成一個(gè)375g樣品,混勻后再取25g作為試樣檢驗(yàn),剩余樣品妥善保存?zhèn)溆谩?br />
(3)世界糧農(nóng)組織(FAO)規(guī)定的食品微生物質(zhì)量
1979年版FAO食品與營(yíng)養(yǎng)報(bào)告中的食品質(zhì)量控制手冊(cè)的微生物學(xué)分析中列舉了各種食品的微生物限量標(biāo)準(zhǔn),由于是按ICMSF的取樣方案判定的,所以在此引用。
2.食物中毒微生物檢驗(yàn)的取樣
當(dāng)懷疑發(fā)生食物中毒時(shí),應(yīng)及時(shí)收集可疑中毒源食品或餐具物、糞便或血液等。
3.人畜共用病病原微生物檢驗(yàn)的取樣
當(dāng)懷疑某一動(dòng)物產(chǎn)品可能帶有人畜共患病病原體時(shí),應(yīng)結(jié)合知識(shí),采取病原體最集中、最易檢出的組織或體液送實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)。

食品微生物檢驗(yàn)采樣方法

按照上述采樣方案,能采取最小包裝的食品就采取完整包裝按無(wú)菌操作進(jìn)行。

不同類(lèi)型的食品應(yīng)采用不同的工具和方法:

①液體食品,充分混勻,用無(wú)菌操作打開(kāi)包裝,用100ml無(wú)菌注射器抽取,注入無(wú)菌盛樣容器。

②固體樣品,大塊整體食品用無(wú)菌刀具和鑷子從不同部位割取,割取時(shí)應(yīng)兼顧表面與深部,并注意其代表性,小塊大包裝食品應(yīng)從不同部位的小塊上切取樣品,放入無(wú)菌容器。

冷凍食品,大包裝小塊冷凍食品按小塊個(gè)體采取,大塊冷凍食品可以用無(wú)菌刀從不同部位削取樣品或用無(wú)菌小手鋸從凍塊上鋸取樣品,也可以用無(wú)菌鉆頭鉆取碎屑狀樣品,放入盛樣容器。

所述食品取樣還應(yīng)注意檢驗(yàn)?zāi)康男铏z驗(yàn)其品質(zhì)情況,應(yīng)取探部樣品。

生產(chǎn)工序監(jiān)測(cè)采樣:若需檢驗(yàn)食品污染情況。

a.車(chē)間用水:自來(lái)水樣從車(chē)間各水龍頭上采取冷卻水。

b.車(chē)間臺(tái)面、用具及加工人員手的衛(wèi)生監(jiān)測(cè):用5cm2孔無(wú)菌采樣板及5支無(wú)菌棉簽擦拭25cm2面積《若所采表面干燥,則用無(wú)菌稀釋液濕潤(rùn)棉簽后擦拭,若表面有水,則直接用棉簽擦拭》,擦拭后立即將棉簽頭用無(wú)菌剪刀剪入盛樣容器。

c.車(chē)間空氣采樣:直接沉降法。將5個(gè)直徑90mm的普通營(yíng)養(yǎng)瓊脂乎板分別置于車(chē)間的四角和中部,打開(kāi)乎皿蓋5min,然后蓋蓋送檢。

食品微生物檢驗(yàn)的樣品處理

樣品處理應(yīng)在無(wú)菌室內(nèi)進(jìn)行,若是冷凍樣品必須事先在原容器中解凍2℃一5℃不超過(guò)18h或45℃不超過(guò)15min。
一般固體食品的樣品處理方法有以下幾種:
1.搗碎均質(zhì)方法
將100g或100g以上樣品剪碎混勻,從中取25g放入帶225mI稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)杯中8000~10000r/min均質(zhì)1min~2min,這是對(duì)大部分食品樣品都適用的辦法。
2.剪碎振搖法
將100g或100g以上樣品剪碎混勻,從中取25g進(jìn)一步剪碎,放入帶有225mL稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的稀釋瓶中,蓋緊瓶蓋,用力快速振搖50次,振幅不小于40cm。
3.研磨法
將100g或100g以上樣品剪碎混勻,取25g放入無(wú)菌乳缽充分研磨后再放入帶有225mI無(wú)菌稀釋液的稀釋瓶中,蓋緊蓋后充分搖勻。
4.整粒振搖法
有完整自然保護(hù)膜的穎粒狀樣品(如蒜瓣、青豆等)可以直接稱(chēng)取25s整粒樣品入帶有225mL無(wú)菌稀釋液和直徑5mm左右玻璃珠的無(wú)菌稀釋瓶中,蓋緊瓶蓋,用力快速振搖50次,振幅在40cm以上。凍蒜瓣樣品若剪碎或均質(zhì),由于大蒜素的殺菌作用,所得結(jié)果大大低于實(shí)際水平。
5.胃蠕動(dòng)均質(zhì)法
這是國(guó)外使用的一種新型的均質(zhì)樣品的方法,將一定量的樣品和稀釋液放入無(wú)菌均質(zhì)袋中,開(kāi)機(jī)均質(zhì)。均質(zhì)器有一個(gè)長(zhǎng)方形金屬盒,其旁安有金屬葉板,可打擊塑樹(shù)袋,金屬模板由恒速馬達(dá)帶動(dòng),作前后移動(dòng)而撞碎樣品。


 樣品的送檢與檢驗(yàn)

(1)采集好的樣品應(yīng)及時(shí)送到食品微生物檢驗(yàn)室,越快越好,一般不應(yīng)超過(guò)3h,如果路途遙遠(yuǎn),可將不需冷凍的樣品保持在1℃一5℃的環(huán)境中,勿使凍結(jié),以免細(xì)菌遭受破壞;如需保持冷凍狀態(tài),則需保存在泡沫塑料隔熱箱內(nèi)(箱內(nèi)有干冰可維持在0℃以下),應(yīng)防止反復(fù)冰涼和溶解。
(2)樣品送檢時(shí),必須認(rèn)真填寫(xiě)申請(qǐng)單,以供檢驗(yàn)入員參考。
(3)檢驗(yàn)人員接到送檢單后,應(yīng)立即登記,填寫(xiě)序號(hào),并按檢驗(yàn)要求放在冰箱或冰盒中,并積極準(zhǔn)備條件進(jìn)行檢驗(yàn)。
(4)食品微生物檢驗(yàn)室必須備有專(zhuān)用冰箱存放樣品,一般陽(yáng)性樣品發(fā)出報(bào)告后3d(持殊情況可適當(dāng)延長(zhǎng))方能處理樣品;進(jìn)口食品的陽(yáng)性樣品,需要保存六個(gè)月方能處理,每種指標(biāo)都有一種或幾種檢驗(yàn)方法,應(yīng)根據(jù)不同的食品、不同的檢驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇恰當(dāng)?shù)臋z驗(yàn)方法。

結(jié)果報(bào)告

樣品檢驗(yàn)完畢后,檢驗(yàn)人員應(yīng)及時(shí)填寫(xiě)報(bào)告單,簽名后送主管人核章,以示生效,并立即交給食品衛(wèi)生監(jiān)督人員處理。
編輯:songjiajie2010

 
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