一、目的與原理：

1、了解掌握單指示劑與雙指示劑甲醛滴定法測(cè)氨基酸總量的方法與原理：

   二、單指示劑甲醛滴定法：

   (一)原理：氨基酸具有酸、堿兩重性質(zhì)，因?yàn)榘被�酸含�?COOH基顯示酸性，又含有-NH₂基顯示堿性。由于這二個(gè)基的相互作用，使氨基酸成為中性的內(nèi)鹽。當(dāng)加入甲醛溶液時(shí)，-NH₂與甲醛結(jié)合，其堿性消失，破壞內(nèi)鹽的存在，就可用堿來滴定-COOH基，以間接方法測(cè)定氨基酸的量，反應(yīng)式可能以下面三種形式存在。

（二）試劑

(1)40％中性甲醛溶液，以麝香草酚酞為指示劑，用1N NaOH溶液中和。

(2)0.1％麝香草酚酞乙醇溶液。

(3)0.100N氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。

(三)操作步驟：

稱取一定量樣品(約含20毫克左右的氨基酸)于燒杯中(如為固體加水50毫升)，加2-3滴指示劑，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡藍(lán)色。加入中性甲醛20毫升，搖勻，靜置1分鐘，此時(shí)藍(lán)色應(yīng)消失。再用0.1OON NaOH溶液滴定至淡藍(lán)色。記錄兩次滴定所消耗的堿液毫升數(shù)，用下述公式計(jì)算

計(jì)算：

        氨基酸態(tài)氮(％)=( N V×0.014×100)/W                                

式中：

N：NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液當(dāng)量濃渡。

V：NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗的總量(m1)

W：樣品溶液相當(dāng)樣品重量(克)。

0.014：氮的毫克當(dāng)量。

三、雙指示劑甲醛滴定法：

(一)原理：

與單色法相同，只是在此法中使用了兩種指示劑。從分析結(jié)果看，雙指示劑甲醛滴定法與亞硝酸氮?dú)馊萘糠?SPAN lang=EN-US>(此法操作復(fù)雜，不作介紹)相近單色滴定法稍偏低，主要因?yàn)閱沃甘緞┘兹┑味ǚㄊ且园被�酸溶液PH值作為麝香草酚酞的終點(diǎn)。PH值在9.2，而雙指示劑是以氨基酸溶液的PH值作為中性紅的終點(diǎn)，PH值為7.0，從理論計(jì)算看，雙色滴定法較為準(zhǔn)確。

    (二)試劑：

    (1)三種試劑同單指示劑法

    (2)0.1％中性紅(50％乙醇溶液)

    (三)操作步驟：

    取相同的兩份樣品，分別注入100毫升三角燒瓶中，  一份加入中性紅指示劑2-3滴，用0.100N NaOH溶液滴定終點(diǎn)(由紅變琥珀色)，記錄用量，另一份加入麝香草酚酞3滴和中性甲醛20毫升，搖勻，以0.100NNaOH準(zhǔn)溶液滴定至淡藍(lán)色。按下述公式計(jì)算。  

計(jì)算：   

氨基酸態(tài)氮(％)=( N(V₂-V₁)×0.014)/W×100

式中：

V₂：用麝香草酚酞為指示劑時(shí)標(biāo)準(zhǔn)堿液消耗量(毫升)

V₁：用中性紅作指示劑時(shí)堿液的消耗量(m1)。

N：標(biāo)準(zhǔn)堿液當(dāng)量濃度。

W：樣品的重量(克)。．

0.014：氮的毫克當(dāng)量。

注意事項(xiàng)：

測(cè)定時(shí)樣品的顏色較深，應(yīng)加活性炭脫色之后再滴定．