一、概要
恩諾沙星（ENR）作為一種氟喹諾酮類物質，能抑制細菌DNA螺旋酶活性，常用于治療家畜禽感染性疾病。隨著ENR的大量使用，殘留于畜禽可食組織中的ENR及其代謝產物環(huán)丙沙星（CIP）引發(fā)了嚴重公共衛(wèi)生問題。
恩諾沙星ELISA檢測試劑盒是應用ELISA技術研發(fā)而成的檢測產品，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。

二、試驗原理
恩諾沙星ELISA檢測試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔條上預包被恩諾沙星抗原，樣本中殘留的恩諾沙星和微孔條上預包被的抗原競爭抗恩諾沙星抗體，加入酶標二抗后，經TMB底物顯色，樣本的吸光值與其殘留物恩諾沙星的含量成負相關，與標準曲線比較再乘以其對應的稀釋倍數，即可得出樣品中殘留物恩諾沙星的含量。

三、適用范圍
恩諾沙星ELISA檢測試劑盒可定性、定量檢測肌肉、肝臟、蜂蜜等樣本中恩諾沙星的殘留量。

四、交叉反應率
恩諾沙星  ………………………………………………100 %

五、檢測步驟
測定前應須知：
1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
3、在ELISA分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
操作步驟：
1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）回溫30min以上，注意每種液體試劑使用前均須輕輕搖勻。
2、取出所需數量的微孔板，將不用的微孔放入帶有干燥劑的錫箔袋中，保存于2～8℃。
3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
4、編號：將樣品和標準品對應微孔按序編號，每個樣品和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣品孔所在的位置。
5、加標準品/樣品：加標準品/樣品50ml/孔到對應的微孔中，然后加入抗試劑50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應30min。
6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用洗滌工作液250ml/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10~20s，用吸水紙拍干（拍干后若有氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
7、加酶標物：加入酶標物100ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應30min，取出重復洗板步驟6。
8、顯色：加入底物液A液50ml/孔，再加底物液B液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應15～20min。（如顏色較淺可適當延長此步的反應時間）
9、測定：加入終止液50ml/孔，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，請在5min內讀完數據），測定每孔OD值。(若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定)。

六、檢測方法靈敏度、準確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.5ppb
樣品最低檢測限：
肌肉樣品………………………………………1ppb
肝臟樣品………………………………………2ppb
蜂蜜樣品……………………………………………2ppb
回收率：
肌肉樣品………………………………………80±10%
肝臟樣品………………………………………75±15%
蜂蜜樣品………………………………………85±10%
精密度：試劑盒的變異系數均小于10%

七、注意事項
1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會導致所有標準的OD值偏低。
2、在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
3、每加一種試劑前需將其搖勻。
4、反應終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
6、儲存條件
保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標板微孔板放進錫箔袋重新密封。標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
7、試劑變質的跡象
發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質，應當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質。
8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長反應時間到30min，但不得超過30min。反之，則減短反應時間。
9、恩諾沙星ELISA快速檢測試劑盒最佳反應溫度為25℃，溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：  該產品有效期為12個月。