一、概要
  硝基呋喃類藥物因有非常好的抗菌作用和藥動(dòng)力學(xué)的特性，曾經(jīng)被廣泛應(yīng)用，作為禽類、水產(chǎn)和豬促生長(zhǎng)的添加劑。但在長(zhǎng)時(shí)間的實(shí)驗(yàn)研究過程中發(fā)現(xiàn)，硝基呋喃類藥物和代謝物均可以使實(shí)驗(yàn)動(dòng)物發(fā)生癌變和基因突變，正因?yàn)槿绱瞬艑?dǎo)致此類藥物禁止在治療和飼料中使用
  用來檢測(cè)呋喃西林代謝物的最常用方法是LC-UV，LC-MS和LC-MS/MS。酶聯(lián)免疫方法結(jié)合了色譜技術(shù)，采用SEM衍生物的特異性抗體，具有很高的精確度和靈敏度，較低的操作技術(shù)要求和短暫的檢測(cè)時(shí)間，檢測(cè)樣品量大等特點(diǎn)在檢測(cè)中很好的表現(xiàn)出來。    
  本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測(cè)產(chǎn)品，能最大限度地減少操作誤差和工作強(qiáng)度。

二、試驗(yàn)原理
 本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法，在酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被呋喃西林代謝物抗原，樣品殘留的呋喃西林代謝物和微孔條上預(yù)包被的抗原競(jìng)爭(zhēng)抗呋喃西林代謝物抗體，加入酶標(biāo)二抗后，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光度值與其殘留物呋喃西林代謝物呈負(fù)相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較再乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣品中呋喃西林代謝物的含量。
三、適用范圍
 可定性、定量檢測(cè)動(dòng)物組織（雞、豬），蜂蜜樣品中的呋喃西林代謝物的殘留量。
四、交叉反應(yīng)率
呋喃西林代謝物……………………………………   100%
呋喃它酮代謝物…………………………………小于 0.1%
呋喃妥因代謝物 …………………………………小于 0.1%
呋喃唑酮代謝物………………………………………小于0.1%

五、檢測(cè)步驟
測(cè)定前應(yīng)須知：
 1、使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20～25℃）。
 2、使用之后立即將所有試劑放回2～8℃。
 3、在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。
 4、在所有恒溫孵育過程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。
 操作步驟：
 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20～25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
 2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。
 3、洗滌工作液在使用前也需回溫。
 4、編號(hào)：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣品和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣品孔所在的位置。
 5、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本：加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50l/孔到對(duì)應(yīng)的微孔中，再加入呋喃西林代謝物酶標(biāo)物50l/孔，再加入呋喃西林代謝物抗試劑50ul/孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)30min。
 6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌工作液250l/孔，充分洗滌4~5次，每次間隔10s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。
 7、顯色：加入底物液A液50l/孔，再加底物液B液50l/孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置25℃避光環(huán)境中反應(yīng)15～20min。
 8、測(cè)定：加入終止液50l/孔，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處（建議用雙波長(zhǎng)450/630nm檢測(cè)，請(qǐng)?jiān)?min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測(cè)定每孔OD值。(若無酶標(biāo)儀，則不加終止液用目測(cè)法可進(jìn)行判定)。

六、檢測(cè)方法靈敏度、準(zhǔn)確度、精密度
試劑盒靈敏度：0.05ppb
檢測(cè)限：
組織、蜂蜜樣品檢測(cè)下限…………………………………0.1ppb
回收率：
水產(chǎn)、肌肉、肝臟蜂蜜組織 …………………………  80±15%
精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%

七、注意事項(xiàng)
 1、室溫低于20℃或試劑及樣品沒有回到室溫（20～25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
 2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
 3、每加一種試劑前需將其搖勻。
 4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。
 5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會(huì)引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號(hào)試劑盒中的試劑。
 6、儲(chǔ)存條件保存試劑盒于2～8℃，不要冷凍，將不用的酶標(biāo)板微孔板放進(jìn)自封袋重新密封。標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。
 7、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。
 8、在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時(shí)間為15～20min即可。若顏色較淺，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間到25min（或更長(zhǎng)），但不得超過30min。反之，則減短反應(yīng)時(shí)間。
 9、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

八、貯藏條件及保存期
貯藏條件：保存試劑盒于2~8℃。
保存期：該產(chǎn)品有效期為12個(gè)月。