高效液相色譜儀的儀器本身是記錄樣品通過(guò)檢測(cè)器時(shí),吸光度的變化而產(chǎn)生的電信號(hào)變化,從而產(chǎn)生色譜譜圖,最終的結(jié)果就要靠后期的色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)。
譜圖處理完即可制作校正曲線,校正曲線是數(shù)據(jù)處理的重點(diǎn),是將標(biāo)樣譜圖的信息與數(shù)據(jù)做成一個(gè)標(biāo)準(zhǔn),供處理試樣譜圖使用。校正是通過(guò)分析指定的準(zhǔn)備好的標(biāo)準(zhǔn)樣品,來(lái)確定計(jì)算絕對(duì)組分濃度的響應(yīng)因子的過(guò)程。接下來(lái)介紹常用的數(shù)據(jù)處理方法:
外標(biāo)法
外標(biāo)法是指添加一定量的標(biāo)準(zhǔn)品于空白樣品中制成對(duì)照樣品,與未知檢測(cè)樣品平行進(jìn)行樣品處理并檢測(cè),根據(jù)對(duì)照品響應(yīng)值與標(biāo)準(zhǔn)品的濃度函數(shù)關(guān)系計(jì)算出未知檢測(cè)樣品中被測(cè)組分濃度的定量方法。
內(nèi)標(biāo)法
內(nèi)標(biāo)法指的是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標(biāo)物加到一定量的被測(cè)樣品混合物中,然后對(duì)含有內(nèi)標(biāo)物的樣品進(jìn)行色譜分析,分別測(cè)定內(nèi)標(biāo)物和待測(cè)組分的峰面積及相對(duì)校正因子,按公式計(jì)算出被測(cè)組分的含量。
兩種數(shù)據(jù)處理方法的區(qū)別
內(nèi)標(biāo)法是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中,外標(biāo)法不是把標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)加入到被測(cè)樣品中,而是在與被測(cè)樣品相同的色譜條件下單獨(dú)測(cè)定。 1、外標(biāo)法要求儀器重復(fù)性很嚴(yán)格,適于大量的分析樣品,因?yàn)閮x器隨著使用會(huì)有所變化,因此需要定期進(jìn)行曲線校正。此法的特點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單,計(jì)算方便,不需測(cè)量校正因子,適于自動(dòng)分析。但儀器的重現(xiàn)性和操作條件的穩(wěn)定性必須保證,否則,會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 2、內(nèi)標(biāo)法要求挺嚴(yán)格的,對(duì)于內(nèi)標(biāo)物的選擇要有一定的原則,適于分析樣品量較少的情況;不要求樣品里的所有組分都出峰,只要內(nèi)標(biāo)物和所關(guān)注的組分出峰并分離好就可以了;定量準(zhǔn)確,對(duì)進(jìn)樣量和操作條件的控制不很嚴(yán)格,但必須準(zhǔn)確稱量試樣和內(nèi)標(biāo)物,否則會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果·。