一、三先三后原則

①觀察圖像時，需要先使用低倍鏡后使用高倍鏡，兩者不可以顛倒；②使用低倍鏡前要移動鏡筒到合適位置，在移動的過程中先注視物鏡，當(dāng)其與裝片距離約為0.5cm時，再注視物鏡；③低倍鏡調(diào)焦時，先使用粗準(zhǔn)焦螺旋，再使用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，但在高倍鏡調(diào)焦時，嚴(yán)禁使用粗準(zhǔn)焦螺旋，只可以使用細(xì)準(zhǔn)焦螺旋

二、放大倍數(shù)與視野亮度的關(guān)系

低倍鏡時，視野相對比較明亮，轉(zhuǎn)用高倍鏡時，視野的亮度會降低，所以要適當(dāng)調(diào)大光圈或者將反光鏡換為凹面鏡，對于觀察顏色比較深的細(xì)胞，視野的亮度要求也比較高，這樣才能觀察清晰，但是對于細(xì)胞本身顏色比較淺或者傾向于無色時，要在視野亮度比較低的情況下觀察。

三、玻片的移動和物象的移動

由于顯微鏡成像是經(jīng)過物鏡和目鏡兩次放大后形成的倒立虛像，物象在視野中的移動方向和裝片的移動方向是相反的，據(jù)此，如果所要觀察的細(xì)胞不在視野中央，則偏向哪個方向，應(yīng)該向哪個方向移動，比如所要觀察的細(xì)胞在實視野的左上角，則應(yīng)該將裝片朝著左上角移動，才可以將細(xì)胞移動到視野中央，即在哪個方向朝哪個方向移動。不過對于細(xì)胞質(zhì)中某細(xì)胞器的順時針或者逆時針流動，則和真實情況一樣，觀察為順時針，則真實為順時針。

四、視野中污點的判斷

在顯微鏡觀察中，如果發(fā)現(xiàn)有污點，需要判斷污點是在目鏡、物鏡或者是在裝片上，一般的操作是先移動目鏡，觀察污點是否移動，如果移動，則是在目鏡上，如果不移動，再嘗試轉(zhuǎn)動物鏡，看下是否移動，如果仍然沒有結(jié)果則移動裝片進行確認(rèn)，確認(rèn)的順序是目鏡→物鏡→裝片，一般不要輕易先移動裝片，不然要重新調(diào)整觀察。

五、關(guān)于顯微鏡的放大倍數(shù)

顯微鏡的放大倍數(shù)等于目鏡的放大倍數(shù)乘以物鏡的放大倍數(shù)，而這個總的放大倍數(shù)指的是被觀察樣品的長度和寬度，并不是面積，面積則是長和寬相乘，對此需要理解視野中一行相連的細(xì)胞如果共有64個，當(dāng)放大倍數(shù)增加4倍時，視野中應(yīng)該還可以觀察到16個細(xì)胞，但是如果視野中64個細(xì)胞為充滿整個視野的分布，此時總的放大倍數(shù)提升4倍，最后可以觀察到應(yīng)該是4個，因為一行相連只需考慮一個維度的增加，而充滿視野則需要思考64個細(xì)胞組成的面積會因為放大倍數(shù)的增加而變小。

六、高倍鏡的使用

遵照先低倍后高倍的原則，需要先在低倍鏡下觀察清楚以后，再換用高倍鏡，另外換用高倍鏡前，需要將所要觀察的物象移動到視野中央，以防止換用高倍鏡后物象移出視野而觀察不到；換用高倍鏡時可以直接轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器，無需提升鏡筒，雖然高倍鏡會因為鏡頭較長距離裝片更近，但正確的操作不用擔(dān)心會觸碰裝片。換用高倍鏡后，如果視野不夠清晰，則只需要調(diào)節(jié)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，通常來說換用高倍鏡后視野會變暗，此時可以通過光圈或者反光鏡的調(diào)整來增加亮度。

七、關(guān)于目鏡和物鏡

兩個都是凸透鏡，目鏡的放大倍數(shù)和長度成反比，而物鏡的放大倍數(shù)和長度成正比，如果想要獲得最大的放大倍數(shù)，需要使用最短的目鏡和最長的物鏡組合，另外兩者構(gòu)造上也有外觀的差異性，目鏡沒有螺紋，可以直接放進鏡筒，而物鏡有螺紋，需要擰在轉(zhuǎn)換器上以固定使用。