1.非特異性擴(kuò)增帶

PCR擴(kuò)增后出現(xiàn)的條帶與預(yù)計(jì)的大小不一致，或大或小，或者同時(shí)出現(xiàn)特異性擴(kuò)增帶與非特異性擴(kuò)增帶。非特異性條帶的出現(xiàn)，其原因：

一是引物與靶序列不完全互補(bǔ)、或引物聚合形成二聚體。

二是Mg²⁺離子濃度過高、退火溫度過低，及PCR循環(huán)次數(shù)過多有關(guān)。其次是酶的質(zhì)和量，往往一些來源的酶易出現(xiàn)非特異條帶而另一來源的酶則不出現(xiàn)，酶量過多有時(shí)也會(huì)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增。

其對(duì)策有：必要時(shí)重新設(shè)計(jì)引物。減低酶量或調(diào)換另一來源的酶。降低引物量，適當(dāng)增加模板量，減少循環(huán)次數(shù)。適當(dāng)提高退火溫度或采用二溫度點(diǎn)法(93℃變性，65℃左右退火與延伸)。

2.片狀拖帶或涂抹帶

PCR擴(kuò)增有時(shí)出現(xiàn)涂抹帶或片狀帶或地毯樣帶。

其原因往往由于

（1）酶量過多或酶的質(zhì)量差

（2）dNTP濃度過高

（3）Mg²⁺濃度過高

（4）退火溫度過低

（5）循環(huán)次數(shù)過多

其對(duì)策有：

（1）減少酶量，或調(diào)換另一來源的酶

（2）減少dNTP的濃度

（3）適當(dāng)降低Mg²⁺濃度

（4）增加模板量

（5）減少循環(huán)次數(shù)