采樣原則：所采集的樣品具有代表性。

采樣容器:不能是新的污染源:不吸收或吸附某些待測組分不與待測組分發(fā)生反應。保證從采樣到分析期間樣品各組分的濃度不發(fā)生改變。

微生物樣品必須按一般無菌操作的基本要求采集,并保證在運送、貯存過程中不受污染。

所需培養(yǎng)基和試劑：營養(yǎng)瓊脂、9ml無菌生理鹽水管。

操作步驟：

1.以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL充分混勻的水樣,注入滅菌平皿中。

2.傾注約15mL已融化井冷卻到45℃左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基,并立即旋搖平皿,使水與培養(yǎng)基充分混勻（每次檢驗時應做一平行接種,同時另用一個平只傾注營養(yǎng)瓊脂養(yǎng)基作為空白對照）

3.待冷卻凝固后,翻轉平皿,使底面向上,置于36℃±1℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)48h±2h,進行菌落計數,即為水樣1mL中的菌落總數。

4.培養(yǎng)完成后，用眼睛直接觀察,必要時用放大鏡檢查,以防遺漏。

實驗數據處理:

若菌落數在100以內時按實有數報告,大于100時,采用兩位有效數字,在兩位有效數字后面的數值,以四舍五入方法計算,為了縮短數字后面零的個數也可用10的指數來表示(見表1)。

國家標準(GB5749-2022)規(guī)定生活飲用水菌落總數每毫升不得超過100個。

操作步驟：

1.以無操作方法吸取1mL充分混勻的水,注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:10稀釋液。

2.吸取1:10的稀釋液1ml，注入盛有9mL滅菌生理鹽水的試管中,混勻成1:100稀師液,按同法依次稀釋成1:1000,1:1000釋液等備用（如此遞增稀釋一次,必須更換一支1m滅菌管）。

3.然后用無菌極管取稀釋的水樣和2個~3個適釋度的水樣1mL,分別注入滅菌平皿內。之后操作同自來水水樣的檢驗步驟。

試驗數據處理:

計算平均菌落數，首先選擇平均菌落在30~300之間者進行計算。

計算方法和報告方式：

一般水源水中菌落總數與水清潔程度的關系：

所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、雙料乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、伊紅美藍培養(yǎng)基。

多管發(fā)酵法步驟:

初步發(fā)酵試驗:采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)18-24h觀察產酸產氣情況。

平板分離:

將產酸產氣的發(fā)酵管分別轉種在伊紅美藍瓊脂平板上，于36 ℃士1℃培養(yǎng)箱內培養(yǎng)18 h~24 h,觀察菌落形態(tài),挑取符合下列特征的菌落進行革蘭氏染色鏡檢:

--深紫黑色.具有金屬光澤的菌落﹔

--紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落﹔

--淡紫紅色、中心較深的菌落。

復發(fā)酵證實試驗:

經上述染色鏡檢為革蘭氏陰性無芽孢桿菌,同時接種乳糖蛋白豚培養(yǎng)液,置36 ℃士1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h士2h,有產酸產氣者,即證實有總大腸菌群存在。

結果報告(MPN):根據 GB5750.12-2022 所附檢索表報告結果。

所需培養(yǎng)基和試劑：乳糖蛋白胨培養(yǎng)液、EC肉湯、伊紅美藍培養(yǎng)基

多管發(fā)酵法步驟:

初步發(fā)酵試驗:采用乳糖蛋白培養(yǎng)液36℃±1℃培養(yǎng)24h觀察產酸產氣情況。

耐熱培養(yǎng):陽性管接種在EC肉湯管中，44.5℃培養(yǎng)24h觀察產酸產氣情況。

平板培養(yǎng):陽性管接種在EMB平板上，36℃±1℃培養(yǎng)24h。

結果報告(MPN):根據 GB5750.12-2023 所附檢索表報告結果。

所需培養(yǎng)基和試劑：EC-MUG培養(yǎng)基

多管發(fā)酵法步驟:

耐熱培養(yǎng):將總大腸菌群初發(fā)酵中產酸或產氣的管進行大腸埃希氏菌檢測，接種此類試管中的液體到EC-MUG管中，在培養(yǎng)箱或恒溫水浴中44.5℃培養(yǎng)24h。如使用恒溫水浴，在接種后30min內進行培養(yǎng)，使水浴液面超過EC-MUG管的液面。

結果報告(MPN):

將培養(yǎng)后的EC-MUG管在暗處用366nm紫外燈照射，如有藍色熒光，則表明水樣中含有大腸埃希氏菌。

計算EC-MUG陽性管數，根據 GB5750.12-2023 所附檢索表報告結果。