實(shí)驗(yàn)室用菌種一是到國(guó)家法定機(jī)構(gòu)采購(gòu)，二是購(gòu)買ATCC菌種，三是科研中菌種交流。不管是哪種來(lái)源，均統(tǒng)一采集。采集中嚴(yán)格按照規(guī)范執(zhí)行。要求包裝可靠，采集迅速，不泄漏不污染。保證菌種合格和環(huán)境安全。采集中要有菌種傳代標(biāo)識(shí)。選擇有資質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)菌株的合格供應(yīng)商，每批標(biāo)準(zhǔn)菌株必須附帶有供應(yīng)商的合格證或檢測(cè)報(bào)告或說(shuō)明書(shū)，來(lái)證明所采購(gòu)的標(biāo)準(zhǔn)菌株是合格的。

2.2標(biāo)準(zhǔn)菌株和驗(yàn)收

實(shí)驗(yàn)室收到標(biāo)準(zhǔn)菌株，首先應(yīng)進(jìn)行符合性感官檢查，記錄菌株號(hào)和標(biāo)準(zhǔn)菌株來(lái)源途徑信息，確保溯源性清楚。同時(shí)還應(yīng)記錄標(biāo)準(zhǔn)菌株名稱和數(shù)量、生產(chǎn)日期、接收日期和有無(wú)破損等情況。

2.3凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)活

①開(kāi)啟產(chǎn)品包裝：先用70%酒精棉擦拭外包裝，從凹口處撕開(kāi)產(chǎn)品外包裝，撕掉標(biāo)簽上的拉片，將其貼于菌株接收、保存記錄序號(hào)前面。

②復(fù)活：選擇合適的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件（根據(jù)生產(chǎn)商說(shuō)明或有關(guān)技術(shù)通則見(jiàn) 附錄）進(jìn)行復(fù)活。菌種的首次活化最好是在非選擇性瓊脂培養(yǎng)基上，除非特殊情況或特別推薦，一般不用液體培養(yǎng)基。凍干菌株的傳代次數(shù)不得超過(guò)5代，從標(biāo)準(zhǔn)菌株保藏中心購(gòu)買的凍干標(biāo)準(zhǔn)菌株為第F0代。

捏管帽處安瓿瓶（僅一次）使其釋放水合液體。垂直握住安瓿瓶并輕拍之，使液體流入含小球的管底。通過(guò)擠捏壓碎小球使其與液體混合，立即將拭子浸于水合液體。擠壓并旋轉(zhuǎn)拭子，接種于初級(jí)培養(yǎng)平板，接種圈的直徑約為25mm，用一無(wú)菌接種環(huán)在先前接種區(qū)域劃線10-20次，促使分離出單菌落。同時(shí)吸出部分菌液接種胰蛋白胨大豆肉湯管，副溶血性弧菌接種3%氯化鈉菌胰蛋白胨大豆肉湯管。將接種好的平板和管立即進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)菌培養(yǎng)溫度通常為25℃或37℃。多數(shù)凍干菌株會(huì)在幾天后長(zhǎng)出，但是少數(shù)菌會(huì)表現(xiàn)出延滯期延長(zhǎng)的現(xiàn)象，需要將正常培養(yǎng)時(shí)間加倍。復(fù)活后的菌株為F1代。

附錄：

③將TSB生長(zhǎng)的濃菌液吸0.5mL于菌株保藏管充分混勻后將液體吸出，將保藏管-18℃保存1-3年為標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株F2代。將平板上生長(zhǎng)的良好菌株接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面（副溶血性弧菌用3%氯化鈉營(yíng)養(yǎng)瓊脂）36℃培養(yǎng)24h當(dāng)作工作菌株，記錄為F3代。

2.4工作菌株確認(rèn)方法及依據(jù)

用無(wú)菌接種環(huán)取上述培養(yǎng)物，在相應(yīng)的培養(yǎng)基平板（營(yíng)養(yǎng)瓊脂、大豆胰蛋白胨瓊脂）上或相應(yīng)的細(xì)菌鑒別平板（如伊紅美藍(lán)、麥康凱、BP等上劃線分離單個(gè)菌落，置適宜條件下培養(yǎng)（若該類微生物為厭氧菌，則培養(yǎng)條件應(yīng)為厭氧條件）。以同樣方法取真菌和酵母菌至SDA（薩布羅培養(yǎng)基）平板上或玫瑰紅鈉培養(yǎng)基平板上，23～28℃下培養(yǎng)7d；培養(yǎng)后觀察是否具有典型的菌落狀態(tài)，然后挑取單一純菌落，進(jìn)行革蘭染色、鏡檢，觀察其染色特征及菌體形態(tài)以確定菌種。

2.5 污染處理

假如在該平板上發(fā)現(xiàn)有其他菌落生長(zhǎng)，則說(shuō)明操作有污染或菌種不純。要將該污染培養(yǎng)物做滅菌處理，尋找原因，重新分離挑選純菌落。

2.6 菌種保存

所有菌種均由實(shí)驗(yàn)室專人(雙人雙鎖)保存于專用冰箱或其它保存方式。要建立菌種登記臺(tái)帳，詳細(xì)記錄菌種采集、保管、制備、使用、處置情況；每一種菌種一定要有檢測(cè)鑒定報(bào)告（具體的的鑒定方法見(jiàn)ATCC提供的菌種證書(shū)方法）；

具體菌種保存方法一般為：

將復(fù)蘇后肉湯與滅菌甘油按15%甘油比例（肉湯8.5mL+甘油1.5mL）混合，-30 ℃凍存，（可用2mL凍存管凍存多管），作為保藏儲(chǔ)備菌株F1代，也可使用商品化的菌種保存管。

2.7菌種的傳代

①標(biāo)準(zhǔn)菌株的復(fù)蘇：

a.菌種操作應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，防止雜菌污染。

b.每次使用和復(fù)蘇時(shí)只需將小珠在平板上滾動(dòng)或置肉湯中培養(yǎng)。

②標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備菌株每轉(zhuǎn)接一次須進(jìn)行確認(rèn)。（確認(rèn)方法一般為他們各自獨(dú)有的形態(tài)，在鑒別培養(yǎng)基上的形態(tài)）

③工作菌株轉(zhuǎn)接的方法：

a.配制營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基（溶血性弧菌加3%氯化鈉 ），121℃高壓滅菌15分鐘后分裝在試管內(nèi)，冷卻后備用。

b.在無(wú)菌條件下，用接種環(huán)挑取菌苔至新鮮試管上作“米”字形劃線接種，放置在36℃的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24小時(shí)。

④工作菌株的使用：

a.內(nèi)部質(zhì)量控制：一個(gè)月一次陽(yáng)性對(duì)照、培養(yǎng)基每批驗(yàn)收；

b.外部質(zhì)量控制：能力驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室比對(duì)；

⑤工作菌株的期間核查：

a.期間核查的頻率：每半年對(duì)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株進(jìn)行一次期間核查。

b.工作菌株期間核查的方法及依據(jù)：同工作菌株的確認(rèn)一樣。

c.建立標(biāo)準(zhǔn)菌株期間核查記錄。

2.8菌種的標(biāo)識(shí)：
菌種代數(shù)的計(jì)算為干粉菌種為第0代，轉(zhuǎn)接一次加一代。具體標(biāo)識(shí)為：例單增李斯特氏菌第0代，標(biāo)識(shí)為DZ-0，第一代標(biāo)識(shí)為DZ-01第一代有12支，則DZ-01-01、……、DZ-01-12；并標(biāo)明日期：如2020.02.13這樣填寫(xiě)。

2.9 菌種的保藏

①將試管內(nèi)菌種放入冰箱中2～8℃冷藏保存。

②將傳代并經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后的菌種放入冰箱中2～8℃保存。每支保存菌種需標(biāo)明菌名、標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)、傳次、傳代日期。

2.10 菌種的銷毀

①菌種使用后或超過(guò)貯存期的應(yīng)進(jìn)行銷毀。

②需銷毀的菌種，應(yīng)用高壓蒸汽（121℃）滅菌30分鐘。

③滅菌后，再進(jìn)行清洗和處理。

④銷毀的菌種應(yīng)做好記錄。銷毀時(shí)由化驗(yàn)負(fù)責(zé)人監(jiān)督銷毀，保管人員負(fù)責(zé)銷毀。