進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，動(dòng)作要準(zhǔn)確敏捷，但又不必太快，以防空氣流動(dòng)，增加污染機(jī)會(huì)。不能用手觸及已消毒器皿，如已接觸，要用火焰燒灼消毒或取備品更換。

為拿取方便，工作臺(tái)面上的用品要有合理的布局，原則上應(yīng)是右手使用的東西放置在右側(cè)，左手用品在左側(cè)，酒精燈置于中央。工作由始至終要保持一定順序性，組織或細(xì)胞在未做處理之前，勿過(guò)早暴露在空氣中。

同樣，培養(yǎng)液在未用前，不要過(guò)早開(kāi)瓶；用過(guò)之后如不再重復(fù)使用，應(yīng)立即封閉瓶口直立可增加落菌機(jī)會(huì)。吸取營(yíng)養(yǎng)液、PBS、細(xì)胞懸液及其它各種用液時(shí)，均應(yīng)分別使用吸管，不能混用，以防擴(kuò)大污染或?qū)е录?xì)胞交叉污染。

工作中不能面向操作野講話(huà)或咳嗽，以免唾沫把細(xì)菌或支原體帶入工作臺(tái)面發(fā)生污染。操作前用酒精擦拭超凈臺(tái)面及雙手。手或相對(duì)較臟的物品不能經(jīng)過(guò)開(kāi)放的瓶口上方，瓶口最易污染，加液時(shí)如吸管尖碰到瓶口，則應(yīng)將吸管丟掉。

在開(kāi)始實(shí)驗(yàn)前要制定好實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序。有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品、清點(diǎn)無(wú)誤后將其放置操作場(chǎng)所（培養(yǎng)室、超凈臺(tái)）內(nèi)，然后開(kāi)始消毒。這可以避免開(kāi)始實(shí)驗(yàn)后．囚物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會(huì)。

無(wú)菌培養(yǎng)室每天都要用0.2%的新潔爾滅拖洗地面—次（拖布要專(zhuān)用）．紫外線(xiàn)照射消毒30-50min，超凈工作臺(tái)臺(tái)面每次實(shí)驗(yàn)前要用75％酒精擦洗。然后紫外線(xiàn)淌毒30min。

在工作臺(tái)面消毒時(shí)切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時(shí)照射紫外線(xiàn)，消毒時(shí)工作臺(tái)面上用品不要過(guò)多或重疊放置．否則會(huì)遮擋射線(xiàn)降低消毒效果。—些操作用具如移液器、廢液缸、污物盒、試管架等用75%酒精擦洗后置于臺(tái)內(nèi)同時(shí)紫外線(xiàn)消毒。

體外培養(yǎng)細(xì)胞缺乏抗感染能力，所以防止污染是決定培養(yǎng)成功或失敗的首要條件。即便使用設(shè)備完善的實(shí)驗(yàn)室。若實(shí)驗(yàn)者粗心大意，技術(shù)操作不規(guī)范,也會(huì)導(dǎo)致污染。因而．為在一切操作中為最大可能的保證無(wú)菌．每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和完全靠。

穿實(shí)驗(yàn)服、佩戴口罩和滅菌手套，長(zhǎng)頭發(fā)的同學(xué)應(yīng)把頭發(fā)扎在腦后，佩戴的手套的上緣應(yīng)該與實(shí)驗(yàn)服的袖口重疊在一起，就是把袖口末端塞進(jìn)手套內(nèi)，并于開(kāi)始操作前要用75％酒精消毒手。

如果實(shí)驗(yàn)過(guò)程中手觸及可能污染的物品和出入培養(yǎng)室都要重新用消毒液洗手。

灼燒是一種可以去除顆粒性灰塵或棉絨的有效辦法，火焰也會(huì)造成附近的氣流上升，避免灰塵沉降。

在無(wú)菌環(huán)境進(jìn)行培養(yǎng)或做其它無(wú)菌工作時(shí)，首先要點(diǎn)燃酒精燈。以后一切操作，如按裝吸管帽、打開(kāi)或封閉瓶口等，都需在火焰近處并經(jīng)過(guò)燒灼進(jìn)行。

開(kāi)啟、關(guān)閉長(zhǎng)有細(xì)胞的培養(yǎng)瓶時(shí)，火焰滅菌時(shí)間要短。防止因溫度過(guò)高燒死細(xì)胞。另外膠塞過(guò)火焰時(shí)也不能時(shí)間長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞。

但是，在生物安全柜內(nèi)，點(diǎn)燃酒精燈進(jìn)行灼燒是不合適的。

 

生物安全柜工作時(shí)，會(huì)為內(nèi)部空間提供一個(gè)穩(wěn)定的層流，但酒精燈的火焰會(huì)對(duì)它產(chǎn)生干擾，進(jìn)而影響內(nèi)部的無(wú)菌環(huán)境，提高了生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。

對(duì)于小體積移液，一般特指小于1mL的液體轉(zhuǎn)移，因?yàn)槠潴w積小，通常需要使用移液器來(lái)操作。

而小體積的移液吸頭比較短，在吸液的過(guò)程中有可能出現(xiàn)移液器下端也進(jìn)入瓶皿內(nèi)部的情況。

此時(shí)就需要特別注意，不能讓移液器碰觸到瓶皿內(nèi)壁，如果碰觸了，則應(yīng)該立即使用70%乙醇清潔移液器下端，然后才可以繼續(xù)往下進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

對(duì)于大體積移液，例如5/10/25mL或以上的液體轉(zhuǎn)移，可以用大量程的移液吸頭或大量程的電動(dòng)移液器輔助移液。

但不管是什么體積的移液，都應(yīng)該確保吸頭或移液管的末端內(nèi)是含有棉花或透氣膠塞的，這樣可以有效避免因?yàn)橐埔哼^(guò)程中，液體吸入移液器內(nèi)部造成污染。

但由于大體積移液的液體轉(zhuǎn)移速度快、量大，有時(shí)候即使有棉花，也會(huì)出現(xiàn)液體被吸入移液器內(nèi)的現(xiàn)象，這時(shí)就只能停止實(shí)驗(yàn)，或改用其他未被污染的移液器來(lái)操作了。

關(guān)于溶液傾倒，有時(shí)液體的轉(zhuǎn)移不需要特別精準(zhǔn)，會(huì)把溶液從一個(gè)瓶?jī)?nèi)直接倒入另一個(gè)瓶?jī)?nèi)或管內(nèi)。

在操作時(shí)，需要注意溶液從原來(lái)的容器中倒入新的容器時(shí)，瓶口應(yīng)保持懸空，而不是直接接觸新容器的瓶口邊緣來(lái)完成液體轉(zhuǎn)移。

因?yàn)楹笳邥?huì)容易出現(xiàn)液橋，即液體在兩個(gè)挨得很近的接觸面之間形成的水柱，這樣的水柱容易被微生物進(jìn)入；同時(shí)，在傾倒的時(shí)候也要注意不要讓液體流淌在容器的外表面，因?yàn)檫@樣也會(huì)提高微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)。