一、厭氧菌標(biāo)本的送檢方法與處理
    標(biāo)本送到實(shí)驗(yàn)室后，應(yīng)在20～30min內(nèi)處理完畢，最遲不超過(guò)2h，以防止標(biāo)本中兼性厭氧菌過(guò)度繁殖而抑制厭氧菌的生長(zhǎng)。如不能及時(shí)接種，可將標(biāo)本置室溫保存（一般認(rèn)為，冷藏對(duì)某些厭氧菌有害，而且在低溫時(shí)氧的溶解度較高）。
1）針筒運(yùn)送：一般用無(wú)菌針筒抽取標(biāo)本后，排盡空氣，針頭插入無(wú)菌橡皮塞，以隔絕空氣，立即送檢。這種方法多用于液體標(biāo)本的運(yùn)送，如血液、膿液、胸腹水、關(guān)節(jié)液等醫(yī).學(xué)教育網(wǎng)搜集整理。
2）無(wú)菌小瓶運(yùn)送：一般采用無(wú)菌的青霉素小瓶，瓶?jī)?nèi)加一定量的培養(yǎng)基和少量氧化還原指示劑，用橡皮蓋加鋁蓋固定密封，排除瓶?jī)?nèi)空氣，充以C02氣體。同時(shí)先觀察瓶?jī)?nèi)氧化還原指示劑的顏色，以判斷瓶?jī)?nèi)是否為無(wú)氧環(huán)境，如合格將用無(wú)菌注射器將液體標(biāo)本注入瓶中即可。
3）棉拭子運(yùn)送：一般不采用棉拭子運(yùn)送，如果使用該方法，一定使用特制運(yùn)送培養(yǎng)基，確保無(wú)氧環(huán)境，確保不被污染，確�？焖偎蜋z。
4）厭氧罐或厭氧袋運(yùn)送：將厭氧罐或厭氧袋內(nèi)裝入可有效消耗氧氣的物質(zhì)，確保無(wú)氧環(huán)境。該方法一般用于運(yùn)送較大的組織塊或床邊接種的培養(yǎng)皿等。

二、厭氧菌的分離培養(yǎng)
    厭氧菌的分離培養(yǎng)主要分初代培養(yǎng)和次代培養(yǎng)兩個(gè)階段，其中初代培養(yǎng)相對(duì)比較困難，關(guān)鍵的問(wèn)題就是厭氧環(huán)境和培養(yǎng)基的選擇。初代培養(yǎng)的一般原則是：
1）先將標(biāo)本涂片染色直接鏡檢，指導(dǎo)培養(yǎng)基的選擇。
2）盡量選用在厭氧菌中覆蓋面寬的非選擇性培養(yǎng)基。
3）最好多選1～2種覆蓋面不同的選擇性培養(yǎng)基。
4）盡量保證培養(yǎng)基新鮮。
5）要考慮到微需氧菌存在的可能。

1.選用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基接種：應(yīng)接種固體和液體兩種培養(yǎng)基；
（1）培養(yǎng)基的使用，應(yīng)注意下列各點(diǎn)：
1）盡量使用新鮮培養(yǎng)基，2～4h內(nèi)用完；
2）應(yīng)使用預(yù)還原培養(yǎng)基，預(yù)還原24～48h更好；
3）可采用預(yù)還原滅菌法制作的培養(yǎng)基（用前于培養(yǎng)基中加入還原劑，如L-半胱氨酸、硫乙醇酸鈉、維生素C及葡萄糖等，盡可能使預(yù)還原劑處于還原狀態(tài)）；
4）液體培養(yǎng)基應(yīng)煮沸10min，以驅(qū)除溶解氧，并迅速冷卻，立即接種；
5）培養(yǎng)厭氧菌的培養(yǎng)基均應(yīng)營(yíng)養(yǎng)豐富，并加有還原劑與生長(zhǎng)刺激因子（血清、維生素K、氯化血紅素、聚山梨酯-80等）。

（2）培養(yǎng)基的選擇：初次培養(yǎng)一般都使用選擇培養(yǎng)基和非選擇培養(yǎng)基。
1）非選擇培養(yǎng)基：本培養(yǎng)基使分離的厭氧菌不被抑制，幾乎能培養(yǎng)出所有的厭氧菌。常使用心腦浸液瓊脂（BHI）、布氏瓊脂（BR）、胰豆胨肝粉瓊脂（GAM）、胰胨酵母瓊脂（EG）、CDC厭氧血瓊脂等。
2）選擇培養(yǎng)基：為有目的選擇常見(jiàn)厭氧菌株，以便盡快確定厭氧的種類。

2.每份標(biāo)本至少接種3個(gè)血平板，分別置于有氧，無(wú)氧及5%～10à2環(huán)境中培養(yǎng)，以便正確地培養(yǎng)出病原菌，從而判斷其為需氧菌、兼性厭氧菌、微需氧菌或厭氧菌中的哪一類。
　
3.厭氧培養(yǎng)法
（1）厭氧罐培養(yǎng)法。
（2）氣袋法。
（3）氣體噴射法：又稱轉(zhuǎn)管法。
（4）厭氧手套箱培養(yǎng)法：是迄今厭氧菌培養(yǎng)的最佳儀器之一。
（5）其他培養(yǎng)法：平板焦性沒(méi)食子酸法；生物耗氧法；高層瓊脂培養(yǎng)法。
　
4.厭氧狀態(tài)的指示：美藍(lán)和刃天青。無(wú)氧時(shí)均呈白色，有氧時(shí)美藍(lán)呈藍(lán)色，刃天青呈粉紅色。
　
　5.分離培養(yǎng)厭氧菌失敗的原因：
①培養(yǎng)前未直接涂片和染色鏡檢；
②標(biāo)本在空氣中放置太久或接種的操作時(shí)間過(guò)長(zhǎng)；
③未用新鮮配制的培養(yǎng)基；
④未用選擇培養(yǎng)基；
⑤培養(yǎng)基未加必要的補(bǔ)充物質(zhì)；
⑥初代培養(yǎng)應(yīng)用了硫乙醇酸鈉作為唯一厭氧菌培養(yǎng)基；
⑦無(wú)合適的厭氧罐或厭氧裝置漏氣；
⑧催化劑失活；
⑨培養(yǎng)時(shí)間不足；
⑩厭氧菌的鑒定材料有問(wèn)題。

三、厭氧菌直接鏡檢初步鑒別

     
coccus，球菌；b：bacillus，桿菌。