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SPA菌協(xié)同凝集試驗

放大字體  縮小字體 發(fā)布日期:2006-06-28

基本原理

由于SPA能與IgG的Fc片段非特異性結(jié)合,同時不影響Fab片段的活性,所以當(dāng)帶有SPA的金黃色葡萄球菌與抗體混合,再加入適量的相應(yīng)抗原,結(jié)果會使出現(xiàn)的凝集反應(yīng)更易于觀察。它對顆粒性抗原和可溶性抗原抗體反應(yīng)都有協(xié)同凝集作用。此方法簡便、快速、便于推廣應(yīng)用。


材料與試劑

1.金黃色葡萄球菌

(1) SPA陽性株:NO.1800株(國內(nèi)分離株)比Cowan株(國際標(biāo)準(zhǔn)株)更為優(yōu)越,在加熱過程中,不易出現(xiàn)自家凝集,更適用于協(xié)同凝集實驗。

(2) SPA陰性株:Wood 46株。

2.試用菌種 炭疽桿菌、枯草桿菌及蠟樣芽胞桿菌。

3.炭疽免疫血清。

4.正常免疫血清。

5.培養(yǎng)基。

6.0.01Mol/L pH 7.4 PBS液,0.1%NaN3的0.01Mol/L pH7.4 PBS液,

0.5%福爾馬林的0.01Mol/L pH 7.4 PBS液。

7.生理鹽水。

8.磁力攪拌器等。


操作方法

1.將N0.1800株接種瓊脂斜面培養(yǎng)基上,37℃培養(yǎng)20h~24h。

2.以少量生理鹽水洗下菌體,4 000r/min離心20min。

3.將沉淀的菌體用0.01mol/L pH7.4 PBS液洗3次,然后用含0.5%福爾馬林的0.01mol/L pH 7.4PBS液制成10%(V/V)懸液,置室溫下3h。

4.將懸液56℃水浴30min,離心,用PBS液洗2次。最后用含0.1%NaN3的PBS液制成10%懸液,即為SPA菌穩(wěn)定液,置4℃冰箱備用。

5.將SPA懸液1ml(如從冰箱拿出,可再用PBS液洗一次),加滅活的炭疽陽性血清0.1ml,37℃30min。

6.4 000r/min離心20min,去上清,沉淀用PBS液洗2次,最后用含0.1%NaN3的PBS液制成10%懸液,共10ml,此即為SPA菌的凝集用試劑。

7.取干凈載玻片,用接種環(huán)取1滴已標(biāo)記的SPA凝集用試劑,然后再從瓊脂斜面上取少量待試細(xì)菌,充分混合,2min內(nèi)紀(jì)錄結(jié)果。

8.對照組的設(shè)置

(1) SPA陰性菌標(biāo)記免疫血清對照。

(2) SPA陽性菌標(biāo)記正常血清對照。

(3) SPA穩(wěn)定液與炭疽桿菌凝集對照。

(4) 抗炭疽血清與炭疽菌凝集對照。

(5) 其它芽胞桿菌凝集試驗對照。


結(jié)果判定

強度以“+~++++”表示:

++++: 2min內(nèi),菌體凝集成大顆粒,液體透明。

+++ : 2min內(nèi),菌體凝集成較大顆粒,液體透明。

++ : 2min內(nèi),菌體凝集成較小顆粒,液體輕度透明。

+ : 2min菌體部分凝集成細(xì)小顆粒,液體混濁。

- :2min內(nèi),無凝集現(xiàn)象,或2min以上才能出現(xiàn)細(xì)小顆粒者。

 

 

 
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