一、沙保羅瓊脂培養(yǎng)基
[用途]
供真菌及酵母樣真菌的分離培養(yǎng)用.
[配法]
麥芽糖40g,蛋白胨10g,瓊脂20g,蒸餾水1L.
將上述成分溶于水,加熱溶解,調(diào)pH至6.0±0.2,分裝三角瓶或試管中,118℃滅菌15min,傾注平板或置斜面,無菌試驗后備用.
[用法]
將標本接種培養(yǎng)基,如系血液標本,則采取1~2ml,與冷卻至45℃左右沙保瓊脂混合,傾注接種平板.分別置35℃和25℃恒溫箱內(nèi)同時培養(yǎng).35℃培養(yǎng)48h,25℃需連續(xù)培養(yǎng)5天,逐日觀察結(jié)果.發(fā)現(xiàn)真菌及酵母樣可疑菌落,轉(zhuǎn)種沙保菌斜面,獲得純培養(yǎng)后進行鑒定.
[質(zhì)量控制]
白色念珠菌和新型隱球菌生長良好.
注:
⑴ 本培養(yǎng)基如不加入瓊脂,即為沙保羅液體培養(yǎng)基,供真菌及念珠菌的增菌培養(yǎng)用.
⑵ 增加氯霉素0.05~0.125mg/ml或放線菌酮0.5mg/ml,可抑制細菌和污染的霉菌及隱球菌生長.此二種藥均耐熱,可直接加入培養(yǎng)基內(nèi)高壓滅菌.
⑶ 添加酵母浸膏5mg/ml,可促進皮膚癬菌生長.增加維生素B 0.1mg/ml,可促進紫色癬菌和斷發(fā)癬菌生長.
⑷ 將麥芽糖減少到20g/L,為沙保羅20g/L麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基,可供誘導(dǎo)真菌產(chǎn)生孢子用.
⑸ 該培養(yǎng)基呈酸性,應(yīng)提高20%的瓊脂用量.
二、玉米粉瓊脂培養(yǎng)基
[用途]
鑒定酵母樣真菌用.白色念珠菌在該培養(yǎng)基上25℃24h培養(yǎng)可長出假菌絲,頂端有典型的厚壁孢子,可與其它念珠菌鑒別.
[配法]
玉米粉4g,瓊脂粉8g,蒸餾水1L
(pH6.0±0.2).
將細米粉加水浸泡數(shù)分鐘,扎緊瓶口,浸入60℃水浴4h,取出后用沙布過濾,除去粗渣,補足水分.無須調(diào)整pH.加入瓊脂,煮沸溶解,有沉淀物再過濾1次,分裝試管,121℃滅菌15min備用.
用玻璃片法點種后,置平皿內(nèi),保持一定濕度,置23~26℃下培養(yǎng)24~48h.取出玻片培養(yǎng)物,用高倍鏡觀察真假菌絲和有無厚壁孢子.
[質(zhì)量控制]
白色念珠菌(ATCC 26790)厚膜孢子陽性;新型隱球菌(ATCC 9763)厚膜孢子陰性.
注:
⑴ 玉米粉可用糯米粉或可溶性淀粉代替,效果相同.
⑵ 該培養(yǎng)基加入10ml/L Tween-80,制成玉米粉Tween-80瓊脂,用途相同,效果更好.